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氨基柱的使用技巧,你知道多少?

更新時(shí)間:2018-06-25瀏覽:3355次
液相色譜柱的固定相可以說是五花八門,有C18,C8,C4,苯基柱,氰基柱,氨基柱等等。色譜柱使用的好壞,直接關(guān)系到分析分離的結(jié)果,我們都知道氨基柱有使用壽命短等問題,今天在這里給大家?guī)戆被氖褂镁S護(hù)指南,希望通過更好的維護(hù)使用,讓我們手中的色譜柱發(fā)揮出更大的作用。
說起氨基柱,大家熟悉的是拿它來做糖的分析。這是一個(gè)典型的HILIC模式。除了HILIC模式以外,氨基柱還可以用做正相和弱陰離子交換兩種模式??梢哉f應(yīng)用范圍和模式非常廣。
說了這么多我們看看下面該如何使用維護(hù)。
新色譜柱如果使用HILIC模式,使用前請(qǐng)使用異丙醇小流速過夜平衡色譜柱。流速建議0.1mL/min,之后再轉(zhuǎn)換到100%乙腈沖洗20柱體積,然后轉(zhuǎn)換到和流動(dòng)相相同比例的不含鹽的乙腈水體系沖洗20柱體積。
沖洗
用乙腈:水=60:40條件對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗,清洗時(shí),不建議水相比例超過40%,過高使用水相容易導(dǎo)致鍵合相水解。
色譜柱再生
當(dāng)色譜柱經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間使用,柱效很低時(shí),可以對(duì)色譜柱再生處理,用乙腈:水(水中加入0.05%氨水)=60:40條件沖洗30柱體積。
保存
一個(gè)月以內(nèi)的保存,請(qǐng)使用與所選用流動(dòng)相組成相同的有機(jī)溶劑和水的混合溶液(不含酸、無機(jī)鹽)進(jìn)行置換,請(qǐng)避免只用水進(jìn)行置換;一個(gè)月以上的長(zhǎng)期保存,在進(jìn)行了上述處理之后,請(qǐng)用乙腈置換并保存。
氨基柱糖類的分析
1
請(qǐng)?jiān)O(shè)定乙腈/水的流動(dòng)相條件。乙腈的濃度越高,則對(duì)糖的保留能力越強(qiáng)。
2
若采用含甲醇或緩沖鹽的流動(dòng)相,峰會(huì)展寬。
3
若將糖的水溶液作為樣品注入,譜峰會(huì)展寬。請(qǐng)使用含乙腈50%以上的溶劑來配制糖類樣品。
4
曾在酸性條件下使用過的色譜柱,糖類分析的保留時(shí)間、峰形會(huì)發(fā)生變化。
離子型物質(zhì)的分析
1
請(qǐng)?jiān)O(shè)定乙腈/磷酸緩沖液且具有一定pH值的流動(dòng)相條件。
2
考察流動(dòng)相條件時(shí),按照pH由高到低的順序進(jìn)行考察。如果曾經(jīng)在低pH下使用,填料的表面將無法回到初始狀態(tài)。
3
有時(shí)需要長(zhǎng)時(shí)間平衡色譜柱(24小時(shí)以上)。平衡所需時(shí)間與通液量和鹽濃度緊密相關(guān),因此,時(shí)間緊急時(shí)請(qǐng)?zhí)岣吡魉伲騪H不變而增加流動(dòng)相的鹽濃度來進(jìn)行平衡。
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