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有哪些因素會影響到反相色譜柱呢?

更新時間:2022-12-10瀏覽:696次
 
  反相色譜是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用*廣泛的技術(shù),主要是因為它適用于分析極大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。大多數(shù)用于反相色譜的固定相本質(zhì)上都是疏水物質(zhì),因此,分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小程度來分離的,樣品基體中其它疏水雜質(zhì)組分也能以同樣的方式保留。
  反相色譜柱是一種常用的色譜柱產(chǎn)品,主要由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成,被廣泛用于多個領(lǐng)域中。在反相色譜柱的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性,延長柱子的使用壽命非常重要。使用時間后就會出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時間改變等變化,如不采取措施,將會縮短色譜柱的使用壽命,影響工作效率,并造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。
  有哪些因素會影響到反相色譜柱呢?
  (1)柱長
  有機(jī)小分子和肽類的分辨率隨柱長的增加而增加.但是柱長增加并不能使蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率顯著增加.它們在較短的柱子上往往也有很好的分離效果。
  (2)流動相的流速。
  有機(jī)小分子和肽類的分辨率對流動相流速非常敏感。而蛋白質(zhì)和核酸等生物大分子的分辨率則不然。流速越小,柱子越長,色譜峰的寬度就越大,分辨率就越小。制備色譜上樣過程中的流速對動態(tài)吸附容量影響很大。
  (3)溫度。
  溫度上升,流動相黏度下降,流動速度加快,且流動相與固定相之間的傳質(zhì)速度加快,使分辨率增加。同時,溫度上升,分子熱運動增加,疏水性作用減弱。升高溫度要考慮目標(biāo)物質(zhì)的熱穩(wěn)定性。
  (4)流動相組成。
  流動相的極性越大,溶質(zhì)的分配系數(shù)越大,洗脫時間越短。RPC多采用降低流動相極性(水含量)的線性梯度洗脫法。水是極性zui強(qiáng)的溶劑,在反相色譜中常常和基礎(chǔ)溶劑配合使用,向流動相中加入不同濃度的、可以與水混溶的有機(jī)溶劑,以得到不同強(qiáng)度的流動相,這些有機(jī)溶劑稱為修飾劑。反相色譜中zui常用的有機(jī)溶劑有甲醇和乙腈。此外,乙醇、四氫呋喃、異丙醇及二氧六環(huán)也常被用作修飾劑。有機(jī)溶劑梯度的大小也會影響分辨率,一般梯度越小.分辨率越大。
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